Raybiotech - Quantibody

ÚVOD

Quantibody® array je multiplexový systém založený na principu sendvičové ELISy a umožňuje simultánní kvantitativní stanovení koncentrace mnoha cytokinů ve vzorku například v séru, plazmě, CSF, buněčném lyzátu, médiu nebo v jiné tekutině. Tato metoda kombinuje výhody vysoké detekční specifity, citlivosti metody ELISA a možnosti stanovení velkého množství cytokinů naráz, jež dosahujeme u protilátkových arrayí.

 

Stejně jako u tradiční sendvičové metody ELISA, i zde používáme pár specifických protilátek pro detekci cytokinů. Vazná protilátka (Capture Antibody) je vázaná k povrchu standardního mikroskopického sklíčka. Po inkubaci se vzorkem dojde k navázání cytokinu na vaznou protilátku. V dalším kroku se váže na cytokin biotinylovaná detekční protilátka, je však zacílená na odlišný epitop cytokinu. Komplex cytosin-protilátka-biotin může být zviditelněn přidáním použitím streptavidinem značené fluorescenční barvy. Fluorescenční signál můžeme snadno detekovat pomocí laserového skeneru.

 

Oproti tradiční metodě ELISA, kde reakce probíhají na mikrotitrační destičce, jsou použita u metody Quantibody array standardní mikroskopická sklíčka. Na mikroskopickém sklíčku je umístěno 16 identických polí, proteinových čipů, které obsahují pozitivní, negativní kontroly a až 40 druhů cytokinů v kvadrupletu. Pokud umístíme čtyři sklíčka do speciálního rámečku, můžeme pracovat s 64 proteinovými čipy naráz. Formát čtyř sklíček v rámečku umožňuje robotické zpracování.

 

Pro kvantifikaci cytokinů používáme definovanou směs cytokinových standardů. Postupně naředěnou směs standardů umísťujeme do prvních pěti polí na sklíčku, abychom mohli vytvořit 5-ti bodovou standardní křivku pro každý stanovovaný cytokin. Během experimentu jsou analyzovány vzorky i standardy simultánně na základě principu metody ELISA. Srovnáním signálu neznámého vzorku se standardní křivkou je možné určit koncentraci cytokinů ve vzorku.

 

 

PROČ POUŽÍVAT QUANTIBODY ARRAY?

 

1) Méně vzorku, více dat:

 

Ke kvantifikaci až 40 cytokinů je třeba pouze 50 µl vzorku. Tato metoda je tedy 80 krát efektivnější než tradiční ELISA. Tuto výhodu ocení zejména ti, kteří pracují se vzácnými vzorky.

 

2) Méně času

 

Zpracování jednoho sklíčka trvá zhruba 4 hodiny. Vzhledem k vysoké výkonnosti metody je možné zpracovat stovky vzorků během jednoho dne.

 

 

3) ELISA - detekční citlivost

 

Metoda ELISA je známá pro svou citlivost a specifičnost při kvantifikaci cytokinů. Produkty Quantibody array využívají výhodu sendvičové ELISA metody, proto mají i podobnou detekční citlivost jako tradiční ELISA.

 

4) Reproducibilita (opakovatelnost)

 

V kitech Quantibody se používá fluorescenční barva Alexa, která je známá svou odolností vůči zeslabení signálu vlivem světla. Tato vlastnost umocňuje vysokou reprodukovatelnost systému. Sklíčka mohou být vícekrát skenována. Pokud zajistíme skladování sklíček v temném prostředí, nejlépe při -30°C a méně, fluorescenční barva vydrží mnoho měsíců i let aniž by ztratila svou citlivost nebo intenzitu.

 

5) Flexibilita

 

Velmi oblíbené a účelné je sestavení Quantibody arraye na zakázku. V dnešní době je možné si vybrat z více než 500-ti set různých druhů cytokinů. Uživatel si však může zvolit i detekční barvu, tedy konjugát Alexa 647 (červený kanál, cy5) nebo konjugát Alexa 555 (zelený kanál, cy3).

Základní přehled molekul: (molekuly_quantibody.xls)

 

6) Software pro kvantitativní analýzu dat

 

Je velmi výhodné používat software pro analýzu dat Q Analyzer, který dodává společnost Raybiotech. Program je založen na formátu Excel a práce s ním je velmi snadná. Výsledná data získaná použitím laserového skeneru jednoduše překopírujeme do programu Q Analyzer. Automaticky tím získáme výsledné hodnoty koncentrací cytokinů v tabulkách a grafech.

 

7) Laserový skener

 

K detekci fluorescenčního signálu používáme laserový skener. Výhodou je minimální údržba tohoto přístroje a velmi snadná obsluha. Přístroj slouží jak pro čtení protilátkových arrayí tak genových mikroarrays. Pokud nemáte přístroj k dispozici, velmi rádi Vám sklíčka přečteme a pošleme vyhodnocená data. Vysoká stabilita fluorescenčního signálu umožňuje velmi snadný transport zpracovaných sklíček. Stačí je pouze nechat ve zkumavkách, zabalit do alobalu, vložit do obálky a my si je již vyzvedneme naší kurýrní službou nebo k Vám přijedeme osobně.

 

8) Pošlete nám vzorky a my Vám dodáme výsledky

 

Pokud si budete přát, můžeme zpracovat Vaše vzorky a zaslat Vám hotové výsledky. Rádi Vám sdělíme ceny našich služeb a další informace.

 

 

VÍCE INFORMACÍ O PRODUKTECH